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组培培养基的配方如下:
1、培养基中的糖类主要是蔗糖,少数情况下使用葡萄糖。大量生产可使用蔗糖。糖在培养基中的作用是提供碳源,同时用于维持渗透平衡,琼脂是固体培养基中的成分,作为固化剂支持。培养物在培养基的成本消耗中,琼脂占有相当大的比例,培养基中琼脂的加入量为4-7g。
2、在组织培养生产中,培养基的制备对母液的需求量相当大,需一批一批地连续配制。为简化配制过程,提高工作效率,将各种所需药品先配制成高浓度溶液,贮备起来。到配制培养基时,按要求的浓度取一定量稀释即可;称这些高浓度的溶液为贮备液,习惯上称母液。
3、组培培养基,也被称为培养基,是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。主要由碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质组成,为组织细胞提供基本营养成分,满足细胞生长、分化所需的不同营养物质需求。
不同的培养基其制备方法也不同,一般包括以下步骤:
(1)准确称量试剂根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。
(2)校正pH值将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6、8~8、0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。
(3)过滤将玻璃漏斗置铁架上,再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
(4)分装将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
(5)灭菌培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。
培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为:配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。
培养基(Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。不同培养基可根据实际需要,添加一些自身无法合成的化合物,即生长因子。培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。组织培养是否成功,在很大程度上取决于对培养基的选择。
不同培养基有不同特点,适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动时,应对各种培养基进行了解和分析,以便能从中选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9-1。
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